基因表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建（轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)）技術(shù)原理
轉(zhuǎn)座子（transposons）是基因組中的“跳躍者”，能夠作為獨(dú)立的單位從基因組的一個(gè)位置移動(dòng)到另一個(gè)位置，也被稱為“跳躍基因”。按照轉(zhuǎn)座機(jī)制的不同，可分為反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子和 DNA 轉(zhuǎn)座子兩類。
DNA轉(zhuǎn)座子（DNA transposons）通過“剪切-粘貼”機(jī)制進(jìn)行，包括轉(zhuǎn)座酶表達(dá)、移動(dòng)、插入三個(gè)階段。轉(zhuǎn)座酶識(shí)別轉(zhuǎn)座子兩端的末端重復(fù)序列（ITRs），將轉(zhuǎn)座子從原來的位置解離下來，再重新整合到基因組上。
目前在脊椎動(dòng)物中應(yīng)用最多的三大轉(zhuǎn)座子是：PiggyBac（PB）、睡美人Sleeping Beauty（SB）和Tol2。
輝駿生物利用PiggyBac轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)進(jìn)行基因表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建，通過對(duì)轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)質(zhì)粒的精心優(yōu)化，使得轉(zhuǎn)座效率更高，能夠?qū)崿F(xiàn)外源基因（尤其是大片段基因）的高水平表達(dá)，該技術(shù)可以替代慢病毒感染法，用于快速構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株，其特點(diǎn)是：低成本、高效率、可插入大片段基因、基因表達(dá)穩(wěn)定。
基因表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建（轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)）技術(shù)優(yōu)勢(shì)
piggyBac載體裝載量大，在5’TR和3’TR之間能攜帶長達(dá)27 kb的DNA，可用于大片段目的基因的表達(dá)
通過酶促反應(yīng)插入目的基因，整合效率遠(yuǎn)高于DNA隨機(jī)插入效率
目的基因表達(dá)穩(wěn)定，可以穩(wěn)定表達(dá)傳代20代
不需要進(jìn)行慢病毒包裝等步驟，實(shí)驗(yàn)周期短
基因表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建（轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)）實(shí)驗(yàn)流程圖
基因表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建（轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)） * 輝駿服務(wù)內(nèi)容
服務(wù)內(nèi)容 | 交付內(nèi)容 | 周期 | 價(jià)格
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1. 預(yù)實(shí)驗(yàn)： 細(xì)胞檢測(cè)：細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)測(cè)試、抗性篩選測(cè)試、基因本底檢測(cè) |
1、過表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株：2個(gè)T25瓶（10^6 次方/瓶）
2、空載對(duì)照細(xì)胞株：2個(gè)T25瓶（10^6 次方/瓶）
3、結(jié)題報(bào)告：質(zhì)粒構(gòu)建、細(xì)胞篩選、表達(dá)檢測(cè)等操作和結(jié)果 |
6-9周 |
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2. 正式實(shí)驗(yàn)： PiggyBac載體構(gòu)建、電轉(zhuǎn)細(xì)胞、抗性篩選、RT-qPCR表達(dá)檢測(cè)、細(xì)胞擴(kuò)大培 養(yǎng)和保存 |
基因表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建 * 輝駿服務(wù)優(yōu)勢(shì)
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效果保障，不成功不收費(fèi) 無效全額退款，100%保證目標(biāo)基因編輯/表達(dá)效果 | 效率保障 快至6周即可交付合格細(xì)胞株，高效實(shí)驗(yàn)流程 | 售后保障 實(shí)驗(yàn)疑問隨時(shí)快速響應(yīng)，專業(yè)技術(shù)團(tuán)隊(duì)全程跟進(jìn) |
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