lncRNA與microRNA互作概述
lncRNA (Long non-coding RNA)即長鏈非編碼RNA，通常長度在200-100000 nt，具有5’帽子和3’polyA尾巴結(jié)構(gòu)。
lncRNAs作用范圍廣泛，機(jī)制非常復(fù)雜，可以與DNA、RNA、蛋白質(zhì)互作，參與表觀、轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后等多個層面的調(diào)控，在生命活動中有重要作用。lncRNA與miRNA的結(jié)合是其重要的調(diào)控方式之一，lncRNA作為“miRNA海綿”，抑制miRNA與mRNA的結(jié)合，促進(jìn)mRNA表達(dá)，該機(jī)制被稱為ceRNA調(diào)控機(jī)制。
lncRNA與microRNA互作服務(wù)信息
目前主要有兩類方法用于研究lncRNA與microRNA的互作，一是雙熒光素酶報告基因法，二是RNA pull down法。
| lncRNA與microRNA互作技術(shù)服務(wù) |
技術(shù)類型
| 技術(shù)目標(biāo) | 技術(shù)原理 | 價格
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| 雙熒光素酶 | 驗(yàn)證lncRNA與miRNA結(jié)合 | 將待測lncRNA序列構(gòu)建到熒光素酶基因的下游，該質(zhì)粒與miRNA mimics共轉(zhuǎn)染待測細(xì)胞；如果miRNA能夠結(jié)合lncRNA，則會抑制上游熒光素酶表達(dá)，使熒光素酶催化底物的光強(qiáng)減弱，根據(jù)化學(xué)發(fā)光值判斷miRNA是否與待測lncRNA結(jié)合 |
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| 雙熒光素酶 | 驗(yàn)證ceRNA機(jī)制 | 將待測mRNA的3’UTR序列構(gòu)建到熒光素酶基因的下游，該質(zhì)粒與miRNA mimics、lncRNA表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染待測細(xì)胞；與lncRNA空載對照組相比，當(dāng)轉(zhuǎn)入lncRNA表達(dá)載體時，miRNA對靶基因3’UTR的調(diào)控減弱，說明三者間存在ceRNA調(diào)控 |
| 外源性RNA pull down | 驗(yàn)證lncRNA與miRNA結(jié)合 | 體外轉(zhuǎn)錄帶有生物素標(biāo)記的lncRNA，并與樣本裂解液孵育，之后利用鏈霉親和素磁珠捕獲體外條件下結(jié)合的靶l(wèi)ncRNA-miRNA復(fù)合物，采用qPCR技術(shù)檢測待測的miRNA |
內(nèi)源性RNA pull down
| 驗(yàn)證lncRNA與miRNA結(jié)合 | 將自主研發(fā)的特異性RNA標(biāo)簽與目標(biāo)lncRNA構(gòu)建融合表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染細(xì)胞使其融合表達(dá)，通過與特異性RNA標(biāo)簽結(jié)合的親和介質(zhì)，將RNA標(biāo)簽-lncRNA與miRNA的復(fù)合體純化出來，采用qPCR法檢測待測miRNA |
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lncRNA與microRNA互作服務(wù)優(yōu)勢
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十年服務(wù)經(jīng)驗(yàn)，眾多服務(wù)案例，服務(wù)成果得到優(yōu)秀期刊認(rèn)可
自有分子及細(xì)胞生物實(shí)驗(yàn)平臺，能有效制定并執(zhí)行最優(yōu)的實(shí)驗(yàn)路線
售后技術(shù)支持將一直保持到客戶發(fā)表文章，確?？蛻舭残倪M(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)及投稿
lncRNA與microRNA互作研究案例
研究背景
肝細(xì)胞癌（HCC）極易發(fā)生轉(zhuǎn)移。TGF-β誘導(dǎo)的上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）在癌細(xì)胞擴(kuò)散中的作用已被證實(shí)，但lncRNAs在TGF信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用仍不清楚。
研究路線
?對HCC細(xì)胞和TGF-β誘導(dǎo)HCC細(xì)胞的基因表達(dá)檢測發(fā)現(xiàn)lncRNA-ATB表達(dá)水平較高
?RIP、RNA pull down、雙熒光素酶和基因表達(dá)實(shí)驗(yàn)證實(shí)對EMT和腫瘤侵襲有抑制作用的miR-200家族可結(jié)合lncRNA-ATB
?表達(dá)檢測和熒光素酶實(shí)驗(yàn)表明lncRNA與ZEB1或ZEB2競爭結(jié)合miR-200s，三者存在ceRNA調(diào)控
?細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、肝組織檢測和小鼠模型實(shí)驗(yàn)均表明lncRNA-ATB通過上述ceRNA作用誘導(dǎo)EMT并促進(jìn)癌細(xì)胞侵襲
?RIP、RNA pull down等實(shí)驗(yàn)篩選并確定了與lncRNA-ATB結(jié)合的mRNA“IL-11”
?細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、肝組織檢測和小鼠模型實(shí)驗(yàn)均表明lncRNA-ATB以不依賴于miR-200s的方式促進(jìn)IL-11 mRNA穩(wěn)定性，進(jìn)而激活STAT3信號，促進(jìn)癌轉(zhuǎn)移
研究結(jié)論
TGF-β激活的lncRNA（lncRNA-ATB）在肝細(xì)胞癌（HCC）轉(zhuǎn)移中上調(diào)，并與不良預(yù)后相關(guān)。本研究從兩個方向揭示了lncRNA促進(jìn)HCC轉(zhuǎn)移的機(jī)制：（1）lncRNA-ATB通過競爭性結(jié)合miR-200家族上調(diào)ZEB1和ZEB2，誘導(dǎo)EMT和侵襲；（2）lncRNA-ATB通過結(jié)合IL-11mRNA、自分泌誘導(dǎo)IL-11和觸發(fā)STAT3信號，促進(jìn)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移到其它部位。
客戶文獻(xiàn)
Yuan J.H. et al: A Long Noncoding RNA Activated by TGF-b Promotes the Invasion-Metastasis Cascade in Hepatocellular Carcinoma. Cancer cell. 2014.
分子細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)
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