熒光素酶 (Luciferase)報告基因系統(tǒng)是以熒光素(luciferin)為底物來檢測熒光素酶活性的一種報告系統(tǒng)。雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)指的是在同一細(xì)胞中同時表達兩種熒光素酶——螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶，利用一個報告基因作為內(nèi)參來校正另一個報告基因，從而減少細(xì)胞活性和轉(zhuǎn)染效率對實驗結(jié)果的影響。
雙熒光素酶報告基因可用于檢測啟動子活性，或者轉(zhuǎn)錄因子和啟動子的結(jié)合。
miRNA靶基因驗證技術(shù)原理
miRNAs常與靶基因的非翻譯區(qū)（常為3’UTR）結(jié)合，從而抑制整個mRNA的翻譯。將待測的miRNA結(jié)合位點序列（靶基因3‘UTR全長或結(jié)合位點附近500bp序列）構(gòu)建到熒光素酶基因的下游，將該質(zhì)粒與miRNA
mimics共轉(zhuǎn)染待測細(xì)胞；如果miRNA能夠結(jié)合待測序列，則會抑制上游熒光素酶表達，使熒光素酶底物發(fā)光減弱；根據(jù)化學(xué)發(fā)光值判斷miRNA是否與待測序列結(jié)合。
miRNA靶基因驗證應(yīng)用范圍
1.miRNA與靶基因結(jié)合驗證
2.ceRNA機制研究：當(dāng)加入競爭性的lncRNA或circRNA時，可以通過觀察Luciferase活性的變化判斷mRNA-miRNA-LncRNA（或circRNA）三者是否存在ceRNA調(diào)控機制。
miRNA靶基因驗證實驗技術(shù)流程
miRNA靶基因驗證技術(shù)服務(wù)*輝駿優(yōu)勢
化學(xué)發(fā)光法檢測，反應(yīng)非常靈敏，可以有效的檢測體內(nèi)微小的調(diào)控作用。
操作簡便，檢測結(jié)果直觀。
miRNA靶基因驗證服務(wù)信息
項目名稱 | 客戶提供 | 結(jié)果交付 | 實驗周期 |
| miRNA靶基因驗證 | 細(xì)胞樣本
實驗信息表（miRNA序列，3’UTR序列或靶點序列，細(xì)胞培養(yǎng)信息等）
| 報告基因載體（野生和突變型）
雙熒光素酶檢測結(jié)果
實驗報告
| 5-6周（不含細(xì)胞培養(yǎng)周期） |
| ceRNA研究 | 細(xì)胞樣本
實驗信息表（miRNA序列，3’UTR序列或靶點序列，lncRNA或circRNA序列，細(xì)胞培養(yǎng)信息等）
| 報告基因載體（野生和突變型）lncRNA或circRNA表達載體
雙熒光素酶檢測結(jié)果
實驗報告
| 5-6周（不含細(xì)胞培養(yǎng)周期） |
miRNA靶基因驗證實驗-客戶文章
【研究內(nèi)容】：本研究發(fā)現(xiàn)miR-9在乳腺癌中上調(diào)，基因表達和雙熒光素酶實驗發(fā)現(xiàn)miR-9通過直接靶向編碼E-cadherin蛋白的mRNA“CDH1“來下調(diào)其表達，導(dǎo)致細(xì)胞運動性和侵襲性增加，進而激活β-catenin信號，導(dǎo)致VEGF表達的升高。同時，ChIP實驗發(fā)現(xiàn)MYC和MYCN可以結(jié)合miR-9-3在基因組中的位點從而激活miR-9。這些發(fā)現(xiàn)揭示了miR-9促進癌癥轉(zhuǎn)移的一個新的調(diào)控信號通路。
使用技術(shù)：雙熒光素酶（Luc）實驗、基因過表達/干擾檢測、ChIP技術(shù)服務(wù)
【研究內(nèi)容】：本研究發(fā)現(xiàn)一種lncRNA“HOTIP“與小細(xì)胞肺癌（SCLC）的化療敏感性、癌細(xì)胞增殖和患者不良預(yù)后有關(guān)。通過miRNA芯片和雙熒光素酶確定了HOTIP可以結(jié)合miR-216a，之后又采用雙熒光素酶檢測、RNA
pull down
MS和RIP等實驗，確定了他們?nèi)唛g的ceRNA調(diào)控機制：HOTIP通過結(jié)合miR-216a來減輕其對抗凋亡因子BCL-2的抑制作用。這些成果闡述了HOTIP在小細(xì)胞肺癌進展中的新作用。
使用技術(shù)：雙熒光素酶檢測服務(wù)、RNA pull down MS實驗
輝駿實力
實驗熱線：4006991663
