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ChainFree^? 系列標(biāo)簽抗體免疫共沉淀試劑盒簡介

       DNA重組技術(shù)使目標(biāo)蛋白帶上特定標(biāo)簽，表達(dá)的融合蛋白再采用標(biāo)簽抗體來檢測，為科學(xué)研究帶來了極大便利。常見的蛋白標(biāo)簽包括Flag、HA、Myc、V5等，這些標(biāo)簽分子量小，對融合蛋白的活性和細(xì)胞內(nèi)定位幾乎沒有影響。  

        針對不同樣本的需求，輝駿生物開發(fā)了分別針對植物和動(dòng)物樣本的5款ChainFree^?標(biāo)簽抗體免疫共沉淀試劑盒：

        實(shí)驗(yàn)前先將Flag標(biāo)簽、HA標(biāo)簽或GFP標(biāo)簽等與目標(biāo)蛋白在樣本中融合表達(dá)。裂解樣本后，將標(biāo)簽抗體磁珠加入樣本中，標(biāo)簽抗體與目標(biāo)融合蛋白及其結(jié)合蛋白形成復(fù)合體，去除未結(jié)合的蛋白后，可以采用多種方法洗脫蛋白質(zhì)。分離的蛋白產(chǎn)物既可以用Western blot檢測已知蛋白，也可以用質(zhì)譜（LC-MS/MS）鑒定未知蛋白。

免疫共沉淀CoIP試劑盒的應(yīng)用方向

蛋白-蛋白間的相互作用是蛋白質(zhì)發(fā)揮生物學(xué)功能的主要模式，蛋白質(zhì)會(huì)通過結(jié)合不同的伙伴來行駛不同的功能，形成復(fù)雜的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)。CO-IP試劑盒采用Flag抗體磁珠、HA抗體磁珠、Myc抗體磁珠、GFP抗體磁珠或mCherry抗體磁珠捕獲樣本中天然結(jié)合的Flag融合蛋白、HA融合蛋白、Myc融合蛋白、GFP融合蛋白或mCherry融合蛋白，以及它們的互作蛋白，不需要購買誘餌蛋白的IP級(jí)別抗體，只需要在細(xì)胞或組織中表達(dá)融合flag標(biāo)簽的誘餌蛋白，即可以利用標(biāo)簽抗體完成內(nèi)源性Co-IP實(shí)驗(yàn)。以下列舉了可應(yīng)用COIP試劑盒的幾個(gè)研究方向：

1. 病毒、細(xì)菌等病原體侵染宿主細(xì)胞的機(jī)制；

2. 酶和底物的作用機(jī)制；

3. 天然狀態(tài)蛋白調(diào)控復(fù)合體的研究。

 ChainFree^?系列CoIP試劑盒-輝駿生物產(chǎn)品優(yōu)勢

1. 無抗體輕重鏈污染：IP復(fù)合物無論采用非變性洗脫還是變性洗脫，均不會(huì)出現(xiàn)抗體的輕、重鏈污染問題。

2. 親和力強(qiáng)：低nM級(jí)別親和力，輕松應(yīng)對低拷貝基因，或難轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。

3. 特異性強(qiáng)：抗體磁珠通過了20株以上的空白細(xì)胞系檢測，不易產(chǎn)生非特異吸附。

4. 結(jié)合量高：每10 μL抗體磁珠可結(jié)合約10~15 μg重組蛋白。

5. 兼容性好：無論標(biāo)簽在誘餌蛋白的N端或C端，都可以識(shí)別。

6. 穩(wěn)定性好：通過了45℃高溫測試。

輝駿生物ChainFree^?標(biāo)簽抗體磁珠與其他同類產(chǎn)品對比圖

Western-Blot結(jié)果顯示：輝駿生物的ChainFree^? 磁珠對誘餌蛋白的親和力強(qiáng)，IP效果優(yōu)于sigma產(chǎn)品，遠(yuǎn)高于國產(chǎn)同類磁珠效果，并且不會(huì)產(chǎn)生抗體輕重鏈污染。

輝駿生物ChainFree^?標(biāo)簽抗體磁珠穩(wěn)定性測試圖

Western-Blot結(jié)果顯示：ChainFree? 磁珠在45℃條件下放置7天，穩(wěn)定性幾乎不受影響。

Flag/HA/Myc/GFP/mCherry標(biāo)簽免疫共沉淀試劑盒使用流程簡述

1. 裂解樣本；

2. 樣本裂解液與Flag磁珠（或HA磁珠、V5磁珠）孵育；

3. 漂洗、洗脫得到目標(biāo)蛋白及其互作蛋白復(fù)合物。

Anti-Flag CoIP試劑盒使用案例

Co-IP western-blot結(jié)果圖

Flag免疫共沉淀（flag co-ip）試劑盒—客戶文章

1. Li H.B. et al: The plant ESCRT component FREE1 shuttles to the nucleus to attenuate abscisic acid signaling. Nature Plants. 2019，IF=17.352. 【研究內(nèi)容】：客戶發(fā)現(xiàn)，作為內(nèi)體蛋白分選轉(zhuǎn)運(yùn)復(fù)合體成分之一的FREE1基因，受到脫落酸刺激時(shí)候會(huì)發(fā)生磷酸化并移位到細(xì)胞核?？蛻衾媒湍鸽p雜交技術(shù)找到兩個(gè)核蛋白ABF4 and ABI5會(huì)與FREE1結(jié)合，免疫共沉淀CoIP實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了FREE與這兩個(gè)蛋白的互作。后續(xù)實(shí)驗(yàn)表明，F(xiàn)REE1通過抑制ABF4、ABI5對下游基因的調(diào)控能力，參與了脫落酸信號(hào)通路。 使用相關(guān)技術(shù)：質(zhì)譜鑒定、免疫共沉淀CoIP、Co-IP MS實(shí)驗(yàn)