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小伙伴們做IP實(shí)驗(yàn)最常碰到的問(wèn)題就是抗體輕重鏈污染，而最近很火的納米抗體磁珠宣稱“絕對(duì)沒(méi)有輕重鏈污染！”，這到底是不是真的呢？

要想知道為什么沒(méi)有輕重鏈污染，得先知道輕重鏈污染是怎么產(chǎn)生的？我們做IP時(shí)，首先在樣本中加入目標(biāo)蛋白抗體和proteinA/G磁珠，或者Flag磁珠等標(biāo)簽抗體磁珠，經(jīng)過(guò)孵育、洗滌等步驟，洗脫IP復(fù)合物，接著做WB，依次加入一抗（目標(biāo)蛋白抗體或Flag抗體）、二抗，最后曝光。

抗體污染產(chǎn)生的原因是：我們?cè)谙疵摃r(shí)把IP抗體也一起洗脫下來(lái)了，在跑SDS-PAGE時(shí)，抗體四聚體變性成了重鏈和輕鏈蛋白，出現(xiàn)在55kD和25kD的位置上；在之后的WB實(shí)驗(yàn)時(shí)，二抗不僅識(shí)別了一抗，還識(shí)別了IP用的抗體，最后不僅曝光出了目標(biāo)蛋白條帶，還把IP抗體條帶也一并顯示出來(lái)了。

那納米抗體和傳統(tǒng)抗體有什么差別？為什么不會(huì)有輕重鏈污染，我們先來(lái)看一下抗體結(jié)構(gòu)：

納米抗體來(lái)源于駱駝科動(dòng)物體內(nèi)的重鏈抗體（HCAb），只有一個(gè)重鏈可變區(qū)，結(jié)構(gòu)很簡(jiǎn)單，沒(méi)有傳統(tǒng)抗體55kD和25kD的重鏈和輕鏈結(jié)構(gòu)，分子量?jī)H為傳統(tǒng)抗體的1/10。

雖然商品化的傳統(tǒng)抗體磁珠已經(jīng)將抗體偶聯(lián)在了磁珠上，但擁有四條鏈結(jié)構(gòu)的傳統(tǒng)抗體掉落的風(fēng)險(xiǎn)要更大，而事實(shí)也證明只要煮磁珠洗脫，抗體必然掉落。相反，納米抗體因結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單而與磁珠結(jié)合更緊密，難以掉落產(chǎn)生污染，并且分子量小，對(duì)IP結(jié)果的影響很小。

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