做Co-IP實(shí)驗(yàn)總踩坑？背景臟到看不清條帶、辛苦捕獲的目標(biāo)條帶莫名消失？其實(shí)關(guān)鍵癥結(jié)就藏在磁珠清洗步驟里！

不用再反復(fù)調(diào)試實(shí)驗(yàn)參數(shù)、糾結(jié)清洗細(xì)節(jié)，輝駿生物直接上視頻實(shí)操，1分鐘手把手教會(huì)你Co-IP磁珠清洗全流程——每一步操作清晰拆解，動(dòng)作要領(lǐng)精準(zhǔn)標(biāo)注，新手也能跟著鏡頭一步步做，輕松搞定清洗難題，杜絕背景污染、目標(biāo)條帶丟失，讓實(shí)驗(yàn)一次出好結(jié)果！

實(shí)驗(yàn)必記小Tips，速存?zhèn)溆茫?/strong>

1?? 漂洗緩沖液提前預(yù)冷至4℃，實(shí)驗(yàn)全程冰上/4℃環(huán)境操作，有效防止蛋白降解；

2?? 加入緩沖液后輕柔顛倒混勻，嚴(yán)禁劇烈渦旋，保護(hù)磁珠完整性，避免影響蛋白結(jié)合；

3?? 嚴(yán)格遵循“磁吸-棄上清-加液”標(biāo)準(zhǔn)流程，確保磁珠完全吸附，不造成樣本損耗；

4?? 規(guī)范清洗3次，最后一輪務(wù)必吸凈上清，最大程度降低實(shí)驗(yàn)干擾；

5?? 每次清洗時(shí)長(zhǎng)控制在1分鐘，平衡清洗效果與蛋白結(jié)合穩(wěn)定性，避免結(jié)合丟失；

6?? 按需調(diào)整緩沖液鹽濃度，高鹽環(huán)境可有效減少非特異性結(jié)合，降低實(shí)驗(yàn)背景。

輝駿生物提供的Co-IP免疫共沉淀服務(wù)分為以下兩種：

1. Co-IP WB，用于檢測(cè)某樣本中的誘餌蛋白和待測(cè)蛋白是否存在相互作用；

2. Co-IP MS，用于篩選某樣本中的誘餌蛋白與哪些蛋白具有相互作用。

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CoIP實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)樣本要求

1. 送樣量要求

▲注意：表列出的均為每組樣本的送樣量，如果實(shí)驗(yàn)和對(duì)照組用的樣本一致，此樣本量*2。詳細(xì)送樣指南聯(lián)系輝駿生物客服或銷售索取

免疫共沉淀CoIP實(shí)驗(yàn)服務(wù)—輝駿生物客戶文章

1. Li H.B. et al: The plant ESCRT component FREE1 shuttles to the nucleus to attenuate abscisic acid signaling. Nature Plants. 2019，IF=17.352. 【研究?jī)?nèi)容】：客戶發(fā)現(xiàn)，作為內(nèi)體蛋白分選轉(zhuǎn)運(yùn)復(fù)合體成分之一的FREE1基因，受到脫落酸刺激時(shí)候會(huì)發(fā)生磷酸化并移位到細(xì)胞核?？蛻衾媒湍鸽p雜交技術(shù)找到兩個(gè)核蛋白ABF4 and ABI5會(huì)與FREE1結(jié)合，免疫共沉淀CoIP實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了FREE與這兩個(gè)蛋白的互作。后續(xù)實(shí)驗(yàn)表明，F(xiàn)REE1通過(guò)抑制ABF4、ABI5對(duì)下游基因的調(diào)控能力，參與了脫落酸信號(hào)通路。 使用相關(guān)技術(shù)：質(zhì)譜鑒定、免疫共沉淀CoIP、Co-IP MS實(shí)驗(yàn)

2. Jiang, S. et al: Cholesterol Induces Epithelial-to-Mesenchymal Transition of Prostate Cancer Cells by Suppressing Degradation of EGFR through APMAP. Cancer Research.2019，IF= 13.312. 【研究?jī)?nèi)容】：客戶利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，篩選出膽固醇致前列腺癌發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)變（EMT）的重要基因APMAP和EGFR。通過(guò)在前列腺癌細(xì)胞表達(dá)3*Flag-APMAP基因，并利用免疫共沉淀CoIP及質(zhì)譜鑒定技術(shù)，客戶發(fā)現(xiàn)EPS15R可與APMAP結(jié)合。進(jìn)一步的研究證實(shí)，體內(nèi)EPS15R-APMAP復(fù)合物通過(guò)EGFR致使細(xì)胞發(fā)生EMT。 使用相關(guān)技術(shù)：蛋白質(zhì)組學(xué)、質(zhì)譜鑒定、免疫共沉淀CoIP

3. Huang C.Y. et al: UBAP2L arginine methylation by PRMT1 modulates stress granule assembly. Cell Death Differ. 2020 , IF=12.067. 【研究?jī)?nèi)容】：前期研究表明UBAP2L蛋白參與應(yīng)激顆粒形成?？蛻粼谶@項(xiàng)研究中，用免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜等技術(shù)，發(fā)現(xiàn)PRMT1甲基化UBAP2L，UBAP2L蛋白并且和另外三個(gè)應(yīng)激顆粒形成有關(guān)的重要蛋白有相互作用。這些蛋白復(fù)合物介導(dǎo)了應(yīng)激顆粒的形成。 使用相關(guān)技術(shù)：CoIP技術(shù)服務(wù)、質(zhì)譜鑒定、修飾位點(diǎn)鑒定