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腺病毒感染目的細胞預(yù)實驗-實驗?zāi)康模捍_定腺病毒感染目的細胞的最低病毒量，各個細胞株的腺病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率都不太一樣， 其中尤以淋巴細胞株最難轉(zhuǎn)導(dǎo)。

輝駿生物腺病毒感染目的細胞具體實驗步驟：

1.    實驗前一天收集處于對數(shù)生長期，生長狀態(tài)良好的目的細胞，用完全培養(yǎng)基稀釋至1×105cells/mL，接種于96孔板（至少接種15個孔的量），每孔接種100  μL上述細胞懸 液（即1×104 cells/well）。5% CO2、37 ℃ 二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過夜。

2.    準備12個無菌的1.5 mL EP管，分別加入180 μL的完全培養(yǎng)基。

3. 有限稀釋法稀釋病毒，從10-1~10-12：取20 μL腺病毒原液加入到第一個管的180 μL完全 培 養(yǎng)基中做1:10稀釋（10-1）；然后以此為起點，從第一個管取20 μL稀釋液到第二管 再做1:10稀釋（10-2），直至稀釋到10-12。

4.    從孵箱取出96孔板，顯微鏡下觀察確定細胞生長狀態(tài)均良好。吸掉孔內(nèi)舊的培養(yǎng)基， 按10-1~10-12的濃度梯度，依次加入100 μL的病毒稀釋液到接種有目的細胞的96孔板中， 每種濃度接種一孔，沒有加入病毒液的細胞孔中加入同樣體積的完全培養(yǎng)基作為對照 組。37  ℃，5%CO2二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

5.    6-12 h以后觀察細胞狀態(tài)。如果細胞實驗組與空白組無明顯差異，表明病毒對細胞無明 顯毒性反應(yīng)，不要換液，繼續(xù)培養(yǎng)。

6.    由于腺病毒感染能力強，請分別在感染后的12、24、48 h觀察細胞中的熒光表達情況。 綜合細胞生長狀態(tài)以及熒光表達量來判斷具有最佳作用效果的病毒稀釋度，并以此稀 釋度作為后續(xù)試驗的依據(jù)。

注意: 在進行細胞轉(zhuǎn)導(dǎo)時，請選擇生長狀態(tài)良好的細胞進行感染，并根據(jù)適當?shù)?MOI 值以確定好適宜的感染劑量，過高滴度的感染劑量會對細胞產(chǎn)生毒性甚至死亡。若是 用于免疫實驗，請根據(jù)不同的動物和不同的免疫途徑確定合適的免疫劑量。