| 名稱 | 貨號(hào)和規(guī)格 | 產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) | 價(jià)格 | |
ChainFree? Flag標(biāo)簽RIP試劑盒 | FI8704(動(dòng)物),12/24次 FI8714(植物),12/24次 | |||
ChainFree? HA標(biāo)簽RIP試劑盒 | FI8705(動(dòng)物),12/24次 FI8715(植物),12/24次 | |||
ChainFree? V5標(biāo)簽RIP試劑盒 | FI8706(動(dòng)物),12/24次 FI8716(植物),12/24次 | |||
| ChainFree? GFP標(biāo)簽RIP試劑盒 | FI8707(動(dòng)物),12/24次 FI8717(植物),12/24次 | |||
| ChainFree? RFP標(biāo)簽RIP試劑盒 | FI8708(動(dòng)物),12/24次 FI8718(植物),12/24次 | |||
RIP(RNA免疫共沉淀)技術(shù)以感興趣的蛋白質(zhì)為中心,尋找與該蛋白質(zhì)結(jié)合的RNA。利用特異性的抗體磁珠捕獲生物樣本表達(dá)的目標(biāo)蛋白,進(jìn)而將與目標(biāo)蛋白結(jié)合的RNA也一起捕獲,之后可以通過(guò)qPCR檢測(cè)預(yù)測(cè)的結(jié)合RNA,還可以通過(guò)測(cè)序技術(shù)來(lái)篩選未知的結(jié)合RNA。
DNA重組技術(shù)使目標(biāo)蛋白帶上特定標(biāo)簽,再采用標(biāo)簽抗體來(lái)檢測(cè)或富集表達(dá)的融合蛋白,為科學(xué)研究帶來(lái)了極大便利。常見(jiàn)的蛋白表位標(biāo)簽有Flag、HA、V5等,這些標(biāo)簽分子量小,對(duì)融合蛋白的活性和細(xì)胞內(nèi)定位幾乎沒(méi)有影響。 常用的熒光標(biāo)簽包括GFP和RFP,與蛋白融合表達(dá)后,可以用于蛋白示蹤和表達(dá)檢測(cè)。
在RIP實(shí)驗(yàn)中,如果誘餌蛋白攜帶標(biāo)簽,可以根據(jù)標(biāo)簽的不同選擇配套的ChainFree? RIP試劑盒。輝駿生物開(kāi)發(fā)了針對(duì)植物和動(dòng)物樣本的5款ChainFree?標(biāo)簽RIP試劑盒,該系列試劑盒采用了優(yōu)化并重組表達(dá)的、無(wú)輕重鏈的標(biāo)簽抗體磁珠進(jìn)行RIP實(shí)驗(yàn)。IP復(fù)合物無(wú)論采用非變性洗脫還是變性洗脫,均不會(huì)出現(xiàn)抗體的輕、重鏈污染問(wèn)題。
| 產(chǎn)品名稱 | 識(shí)別的標(biāo)簽序列 | 磁珠偶聯(lián)抗體 |
| ChainFree? Anti-Flag RIP試劑盒 | DYKDDDDK | 優(yōu)化并重組表達(dá)的無(wú)輕、重鏈的Flag抗體 |
| ChainFree? Anti-HA RIP試劑盒 | YPYDVPDYA | 優(yōu)化并重組表達(dá)的無(wú)輕、重鏈的HA抗體 |
| ChainFree? Anti-V5 RIP試劑盒 | GKPIPNPLLGLDST | 優(yōu)化并重組表達(dá)的無(wú)輕、重鏈的V5抗體 |
| ChainFree? Anti-GFP RIP試劑盒 | 綠色熒光蛋白(GFP或EGFP) | 優(yōu)化并重組表達(dá)的無(wú)輕、重鏈的GFP抗體 |
| ChainFree? Anti-RFP RIP試劑盒 | 紅色熒光蛋白(mCherry等) | 優(yōu)化并重組表達(dá)的無(wú)輕、重鏈的RFP抗體 |
RNA結(jié)合蛋白(RNA binding protein,RBP)是一類功能強(qiáng)大而廣泛的調(diào)節(jié)因子,約占細(xì)胞編碼的所有蛋白的5%~10%。目前除了少數(shù)RNA以核酶形式單獨(dú)發(fā)揮功能,大部分RNA通過(guò)與蛋白結(jié)合形成RNA-蛋白復(fù)合物來(lái)發(fā)揮作用。
一方面,RBP參與RNA合成、可變剪接、修飾、轉(zhuǎn)運(yùn)、翻譯及胞內(nèi)定位等多個(gè)轉(zhuǎn)錄后調(diào)控過(guò)程,調(diào)控mRNA穩(wěn)定性、lncRNA活性、miRNA沉默復(fù)合體形成等生物學(xué)過(guò)程;另一方面,RNA也會(huì)調(diào)節(jié)這些蛋白質(zhì)的活性、定位或與其他蛋白質(zhì)的相互作用,從而影響RBP介導(dǎo)的各種細(xì)胞事件。RNA與蛋白質(zhì)的相互作用對(duì)于維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)是非常重要的,干擾這種相互作用將會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞功能失調(diào)和相關(guān)疾病的發(fā)生。
ChainFree?系列RIP試劑盒-輝駿生物產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
1、無(wú)抗體輕重鏈污染:IP復(fù)合物無(wú)論采用非變性洗脫還是變性洗脫,均不會(huì)出現(xiàn)抗體的輕、重鏈污染問(wèn)題。
2、親和力強(qiáng):低nM級(jí)別親和力,輕松應(yīng)對(duì)低拷貝基因,或難轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。
3、特異性強(qiáng):抗體磁珠通過(guò)了20株以上的空白細(xì)胞系檢測(cè),不易產(chǎn)生非特異吸附。
4、結(jié)合量高:每10 μL抗體磁珠可結(jié)合約15 μg重組蛋白。
5、兼容性好:無(wú)論標(biāo)簽在誘餌蛋白的N端或C端,都可以識(shí)別。
6、穩(wěn)定性好:通過(guò)了45℃高溫測(cè)試。


輝駿生物ChainFree?標(biāo)簽抗體磁珠與其他同類產(chǎn)品對(duì)比圖
Western-Blot結(jié)果顯示:輝駿生物的ChainFree? 磁珠對(duì)誘餌蛋白的親和力強(qiáng),IP效果優(yōu)于sigma產(chǎn)品,遠(yuǎn)高于國(guó)產(chǎn)同類磁珠效果,并且不會(huì)產(chǎn)生抗體輕重鏈污染。

輝駿生物ChainFree?標(biāo)簽抗體磁珠穩(wěn)定性測(cè)試圖
Western-Blot結(jié)果顯示:ChainFree? 磁珠在45℃條件下放置7天,穩(wěn)定性幾乎不受影響。
Flag/HA/V5/GFP/RFP標(biāo)簽RIP試劑盒使用流程簡(jiǎn)述
1. 裂解樣本;
2. 樣本裂解液與Flag磁珠(或HA磁珠、V5磁珠、GFP磁珠、RFP磁珠)孵育;
3. 漂洗去除未結(jié)合的RNA;
4. 洗脫目標(biāo)蛋白,提取結(jié)合的RNA。
ChainFree? Anti-HA RIP試劑盒使用案例

RIP:目標(biāo)蛋白的western-blot結(jié)果圖

RIP:結(jié)合RNA的qPCR檢測(cè)結(jié)果



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