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Protein G樹脂產(chǎn)品信息

Protein G 是從 G 類鏈球菌中分離出來的胞壁蛋白，能與哺乳動物的 IgG 重鏈 Fc 段結(jié)合。 Protein G Agarose 是用于分離、純化免疫球蛋白 G (IgG) 的親和層析介質(zhì)。
       輝駿生物生產(chǎn)的 Protein G Agarose 以高度交聯(lián)的 4% 瓊脂糖凝膠為基質(zhì)， 通過化學(xué)方法定向、高效偶聯(lián)了重組 Protein G。 哺乳動物、植物、細菌、酵母、昆蟲等多種生物的細胞或組織裂解液、細胞分泌液上清、血清、動物腹水以及其它的免疫抗原等均適用本產(chǎn)品。

Protein G樹脂產(chǎn)品屬性

Protein G樹脂使用案例

(1) Input：樣本裂解液；  (2)  IgG：normal IgG的IP產(chǎn)物（對照組）；   (3)  Anti-Bait：誘餌蛋白抗體的IP產(chǎn)物（實驗組）。

Protein G樹脂使用方法（參考）

 
1. 抗原樣本制備
（1）將收集好的樣本置于冰上， 每組樣本加入 300~500 μL 預(yù)冷的裂解緩沖液，吹打混勻。

（2）a. 動物樣本： 最好冰上超聲至溶液基本澄清； 如果無超聲條件， 可以置于冰上裂解 30 min，間隔手動混勻。
         b. 植物、微生物樣本：冰上超聲破碎至溶液基本澄清。
（3）4℃ 12000 g 離心 15 min，收集上清至新的離心管中，取 30 μL 作為 input，剩余置于冰上備用或- 80℃保存。

2. 免疫共沉淀
(1)  向樣本裂解液中加入適量抗體（按照抗體說明書添加），混勻儀上室溫孵育 1~2 h 或 4 ℃過夜。
(2)  取出 Protein G 樹脂， 上下顛倒混勻， 取 30~50 μL 樹脂到新的離心管中。
(3)  加入 200 μL 漂洗液，顛倒混勻 30 次，500 g離心5 min，棄上清； 重復(fù)該漂洗操作一次。
(4)  向上步樹脂中加入步驟（1）的樣本/抗體混合物，放混勻儀上室溫孵育 1 h 或 4 ℃孵育 2 h， 4 ℃ 500 g 離心 5 min，棄上清。
(5)  加入 500 μL 漂洗液，顛倒混勻 30 次，4 ℃ 500 g離心5 min，棄上清；重復(fù)該漂洗操作兩次，共漂洗三次。

3. 洗脫
(1)  SDS-PAGE上樣緩沖液洗脫法（變性洗脫法）：加入30~50 μL 1×SDS-PAGE上樣緩沖液，95oC加熱5分鐘。12000 g離心 30 s， 收集上清至新的離心管中。 該洗脫產(chǎn)物適合于 SDS-PAGE 或 Western Blot 檢測。
(2)  非變性洗脫法：加入 30~50 μL 酸性洗脫緩沖液，渦旋震蕩 20 s，放混勻儀上室溫洗脫 10~15 min，渦旋震蕩20 s； 4 ℃ 12000 g離心 5 min，收集上清至新離心管中，并立即滴入占總體積1/10體積的中和緩沖液，將洗脫產(chǎn)物 pH 調(diào)節(jié)至中性，- 80 ℃保存或直接用于后續(xù)實驗。洗脫后的蛋白保持原有的生物活性，便于后續(xù)檢測（例如SDS-PAGE、Western-blot、質(zhì)譜實驗等）。

注意事項

1.  本產(chǎn)品僅限于科學(xué)研究使用，不得用于臨床診斷或治療。
2.  為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。