雙向電泳是最早、最經(jīng)典的蛋白質(zhì)組技術(shù)，適用于大部分樣本，只是對(duì)強(qiáng)酸或強(qiáng)堿性蛋白，以及分子量太大或太小的蛋白質(zhì)分離效果不好；另外由于各個(gè)樣本需要單獨(dú)跑膠，很難避免操作誤差對(duì)結(jié)果的影響，可能導(dǎo)致定量不準(zhǔn)確；但是雙向電泳的服務(wù)價(jià)格相對(duì)便宜，可以用于樣本差異的初步篩選。

DIGE在雙向電泳基礎(chǔ)上做了改進(jìn)，引入了熒光標(biāo)記物和內(nèi)標(biāo)，可以使定量更加準(zhǔn)確；但該技術(shù)也是依據(jù)蛋白的等電點(diǎn)和分子量分離，因此對(duì)強(qiáng)酸或強(qiáng)堿性蛋白，以及分子量太大或太小的蛋白質(zhì)分離效果也不好。

iTRAQ、TMT、label-free和SILAC都是利用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)來(lái)尋找差異蛋白。其中，iTRAQ和TMT的原理和檢測(cè)方法基本一致，只是使用了不同的標(biāo)記物；TMT有10種標(biāo)記物，可對(duì)多達(dá)10種不同樣本進(jìn)行分析，但是由于其標(biāo)記物的質(zhì)量數(shù)非常相近，因此必須使用超高分辨率的質(zhì)譜（Thermo公司的QE質(zhì)譜儀）才可以滿足檢測(cè)，這也必然會(huì)導(dǎo)致信號(hào)干擾更多，可能會(huì)影響定量的準(zhǔn)確性；label-free是非標(biāo)記的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，由于沒有標(biāo)記物，其定量需要依賴于操作和質(zhì)譜儀的穩(wěn)定性，該技術(shù)鑒定到的蛋白數(shù)目會(huì)少于iTRAQ技術(shù)，并且定量的準(zhǔn)確性較差，優(yōu)勢(shì)是服務(wù)費(fèi)用較低；SILAC是基于穩(wěn)定同位素標(biāo)記的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的蛋白質(zhì)組學(xué)方法，利用不同的同位素培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)不同組別的細(xì)胞，達(dá)到體內(nèi)標(biāo)記的目的，其定量準(zhǔn)確性要比其他蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)更高；但是由于缺乏合適的同位素培養(yǎng)基，該方法基本只能用于可傳代的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系。

從定量準(zhǔn)確性、應(yīng)用性等各方面綜合考慮， iTRAQ技術(shù)已成為近年來(lái)利用最廣泛的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)。

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iTRAQ技術(shù)實(shí)驗(yàn) 客戶文獻(xiàn)

1. Li K. et al: Tyrosine kinase Fyn promotes osteoarthritis by activating the β-catenin pathway. Ann Rheum Dis. 2018，IF=14.299. 【研究?jī)?nèi)容】：骨關(guān)節(jié)炎和軟骨退變過(guò)程中，WNT/β-catenin被激活的機(jī)制尚未完全明確，本研究利用iTRAQ蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，篩選了年輕（2月齡）和老齡（12月齡）小鼠的蛋白表達(dá)差異，并發(fā)現(xiàn)一種在老年軟骨中強(qiáng)烈上調(diào)的蛋白——酪氨酸激酶Fyn。為了探究Fyn促進(jìn)骨關(guān)節(jié)炎發(fā)展的機(jī)制，客戶將免疫沉淀（IP）與蛋白質(zhì)組學(xué)分析相結(jié)合，最終證明酪氨酸激酶Fyn可以通過(guò)激活β-catenin通路促進(jìn)關(guān)節(jié)炎，為骨關(guān)節(jié)炎提供了一個(gè)新的治療靶點(diǎn)。 使用技術(shù)：iTRAQ蛋白質(zhì)組學(xué)分析、iTraq實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)

2. Wu X.S. et al: Ubiquitin-specific protease 3 promotes cell migration and invasion by interacting with and deubiquitinating SUZ12 in gastric cancer. J Exp Clin Cancer Res. 2019，IF= 7.068. 【研究?jī)?nèi)容】：泛素特異性蛋白酶3 (USP3) 的異常表達(dá)可能在腫瘤發(fā)展中起重要作用，然而其促進(jìn)胃癌轉(zhuǎn)移的機(jī)制尚不明確。本研究利用itraq蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)鑒定了USP3過(guò)表達(dá)胃癌細(xì)胞與對(duì)照細(xì)胞之間差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，發(fā)現(xiàn)SUZ12對(duì)于USP3介導(dǎo)的胃癌活性是不可或缺的，USP3結(jié)合SUZ12，去泛素化SUZ12并使其穩(wěn)定。SUZ12敲除抑制USP3誘導(dǎo)的遷移、侵襲和EMT。結(jié)果表明USP3-SUZ12信號(hào)通路促進(jìn)胃癌發(fā)展。   使用技術(shù)：itraq定量實(shí)驗(yàn)、itraq定量蛋白組學(xué)檢測(cè)

iTRAQ實(shí)驗(yàn)技術(shù)應(yīng)用

1.蛋白鑒定和定量；
2.差異蛋白的篩選和鑒定。

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